接上文，我們了解了CD28和其配體B7-1（CD80）/B7-2（CD86）對T細胞激活作用，與其中發(fā)揮反饋抑制調(diào)節(jié)的CTLA-4（CD152）一起構成了最明確的調(diào)節(jié)T細胞途徑。今天我們就具體聊聊CTLA-4靶點，及對T細胞的負反饋調(diào)節(jié)。更多關于CD28>>
1、CTLA-4表達
CTLA-4，又稱為CD152，由基因CTLA4編碼。除了調(diào)節(jié)性 T 細胞（Treg）上組成性表達的CTLA-4，一般靜息T細胞的細胞表面只能檢測到少量的CTLA-4，大多數(shù)CTLA-4分子位于核高爾基囊泡，內(nèi)體和溶酶體的細胞內(nèi)區(qū)室中。
（T 細胞上 CTLA-4 分布，數(shù)據(jù)來源 Uniprot）
當T細胞受TCR/CD28共刺激活化后，會誘導CTLA-4重新定位到細胞表面。
（數(shù)據(jù)來源 Rowshanravan B, et al. Blood. 2018）
2、CTLA-4功能
CTLA-4在控制T細胞活化和耐受性中起著至關重要的作用：總的來說一方面在調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）上介導其免疫抑制能力；另一方面在靜息T細胞活化后表達CTLA-4，作為反饋控制機制，通過調(diào)節(jié)IFN-γ、T 細胞分化、擴張、細胞接觸和遷移等細胞因子的產(chǎn)生來平衡適應性免疫反應的強弱。
（數(shù)據(jù)來源 Lingel H, et al. Semin Immunol. 2019）
但是關于CTLA-4如何發(fā)揮其抑制作用，仍然存在許多機制性問題。目前觀點主要圍繞CTLA-4通過細胞內(nèi)在和細胞外在機制兩大類方式抑制T細胞反應。
- 細胞內(nèi)在調(diào)控
（數(shù)據(jù)來源 Schildberg FA, et al. Immunity. 2016）
1、抑制信號：通過CTLA-4的信號可以干擾T細胞受體(TCR)和CD28的近端信號；
2、配體競爭：CTLA-4是比CD28對CD80/CD86更有親和力的受體，能在CD80/CD86 結合上勝過 CD28；
3、促進粘附或減弱信號停留：CTLA-4可通過LFA1介導的途徑增加T細胞/APC粘附，并通過減少抗原呈遞細胞（APC）/T細胞相互作用的持續(xù)時間，導致T細胞激活減弱；
4、不依賴配體的抑制：不能與配體CD80/CD86結合的CTLA-4剪接變體可能通過與全長CTLA-4類似的信號通路抑制T細胞激活。
- 細胞外在調(diào)控
（數(shù)據(jù)來源 Schildberg FA, et al. Immunity. 2016）
1、通過配體逆向傳遞抑制信號進入抗原呈遞細胞（APC）：CTLA-4可能通過CD80和CD86反向信號進入抗原呈遞細胞（APC），導致IDO的產(chǎn)生和T細胞效應反應的抑制。
2、減少配體表達/可用性：分泌因子如 IL10、TGFβ或CTLA-4的可溶性剪接變體可降低配體 CD80/CD86 的表達或可用性。
3、跨內(nèi)吞作用：CTLA-4 與CD80或CD86結合可導致APC配體的跨胞吞作用，導致APC表面配體水平降低。
CTLA-4阻斷劑的開發(fā)主要依賴對CTLA-4配體競爭機制的理解。像之前CD28靶點中提到的Five Prime公司的FPT155和Alpine Immune的ALPN-202，都是很好的重組蛋白阻斷CTLA-4配體通路，增強T細胞活性案例。
4、CTLA-4靶點開發(fā)
CTLA-4靶點成藥性思路，主要基于抗CTLA-4抗體與CTLA-4分子高親和力結合，介導Treg耗盡或功能阻斷，從而增強T細胞激活和對癌癥的免疫反應。CTLA-4阻斷的影響可以通過多種機制介導：防止跨內(nèi)吞作用增加抗原呈遞細胞上的CD80/CD86水平，提高T細胞活化響應；直接造成Treg細胞毒性；引發(fā)腫瘤內(nèi)巨噬細胞的FcR-IV介導的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）。
（數(shù)據(jù)來源 Rowshanravan B, et al. Blood. 2018）
目前CTLA-4賽道熱鬧非常。哪怕是像百時美施貴寶在已 Ipilimumab（抗CTLA-4單克隆抗體）上市的情況下，290多項臨床不斷探索新適應癥和聯(lián)用藥物，仍在額外加碼其他兩款CTLA-4 單抗（BMS-986249，BMS-986218），足見CTLA-4的可開發(fā)性。其中BMS-986249 是與Cytomx 合作，在Ipilimumab基礎上利用其自有Probody前藥技術加以改造而成，提高了耐受劑量和降低脫靶效應。
（數(shù)據(jù)來源 clinicaltrials, 各公司官網(wǎng)）
整體臨床試驗上看，國內(nèi)外CTLA-4開發(fā)主要分兩種治療方式：單抗或和PD-1/PD-L1單抗聯(lián)用；關聯(lián)其他熱門靶點構建雙特異性抗體。國內(nèi)在CTLA-4管線走在前列的主要有信達生物，康方生物，康寧杰瑞，同時也是這些公司的重頭管線。貝達藥業(yè)引進Agenus的AGEN1184，也躋身在開發(fā)前列。
- 信達生物
IBI-310是信達生物開發(fā)的CTLA-4全人源單克隆抗體，在1a/1b期研究中展現(xiàn)了良好的安全性，正在推進多個適應癥的注冊性臨床研究。
（數(shù)據(jù)來源 信達生物官網(wǎng)）
- 康方生物
AK104是康方生物全球首個進入臨床試驗的PD-1/CTLA-4雙特異抗體，AK104與已經(jīng)公布研究數(shù)據(jù)的PD-1單藥或PD-1和CTLA-4聯(lián)合用藥相比，在療效上有顯著提升，而且非常有效地降低了聯(lián)合用藥中出現(xiàn)的毒副作用。
同時在眾多實體瘤適應癥上廣泛布局。
（數(shù)據(jù)來源 康方生物官網(wǎng)）
- 康寧杰瑞
KN046是康寧杰瑞自主研發(fā)的PD-L1/CTLA-4雙特異性抗體，其創(chuàng)新設計包括：采用機制不同的CTLA-4與PD-L1單域抗體融合組成，可靶向富集于PD-L1高表達的腫瘤微環(huán)境及清除抑制腫瘤免疫的 Treg。
KN046在澳大利亞和中國已開展覆蓋非小細胞肺癌、三陰乳腺癌、食管鱗癌、肝癌、胰腺癌等10余種腫瘤的近20項不同階段臨床試驗，試驗結果顯示出良好的安全性和有效性。美國 FDA 基于在澳大利亞和中國取得的臨床試驗結果，批準KN046在美國直接進入Ⅱ期臨床試驗。
（數(shù)據(jù)來源 康寧杰瑞官網(wǎng)）
另外我們再看看一些有意思的雙抗工程改造：
- Xencor & XmAb22841/XmAb20717
（數(shù)據(jù)來源 Xencor官網(wǎng)）
XmAb22841/XmAb20717均為CTLA2相關雙特異性抗體，有選擇性的分配Fab端可變區(qū)和恒定區(qū)的比例，生物學功能都是旨在促進腫瘤選擇性T細胞活化，并且雙特異性Fc結構域具有長循環(huán)半衰期，穩(wěn)定性和易于制造的特點。
- Alligator Bioscience & ATOR-1015
Alligator Bioscience 是瑞典一家從事腫瘤定向免疫療法的早期階段開發(fā)公司，特別是激動性單抗和雙特異性抗體。
（數(shù)據(jù)來源 Alligator Bioscience 官網(wǎng)）
ATOR-1015是抗OX40/CTLA-4雙特異性抗體，與調(diào)節(jié)性T細胞（抑制免疫系統(tǒng)的細胞）上的CTLA-4和OX40結合，激活巨噬細胞以殺死Treg，消除Treg對有益T細胞的抑制作用，同時效應T細胞（淺綠色）數(shù)量成倍增加并被激活以殺死腫瘤細胞。
- 和鉑醫(yī)藥 & HBM4003
（數(shù)據(jù)來源 和鉑醫(yī)藥官網(wǎng)）
和鉑醫(yī)藥的HBM4003是通過自有 HCAb 技術平臺開發(fā)的全人源僅含重鏈可變區(qū)的抗CTLA-4單克隆抗體，經(jīng)過工程改造，可顯著增強ADCC并增加Treg細胞耗竭。
4、CTLA-4小結
作為與免疫檢查點PD-1齊名的CTLA-4，兩者的開發(fā)有很多共性：比方說適應癥的廣譜性，同其他靶點的互補性。同時 CTLA-4 和 PD-1 表達的差異模式（CTLA-4 主要表達在調(diào)節(jié)性 T 細胞（Treg）上，PD-1 主要存在活化的 T 細胞上；主要分別存在于淋巴組織和外周組織中），CTLA-4 在耐受誘導中起早期作用，而 PD-1 在耐受性誘導晚期起作用。所以將 CTLA-4 和 PD-1 關聯(lián)開發(fā)藥物是非常理想的。
締碼生物科技有限公司是一家專注于可成藥靶點臨床前研發(fā)產(chǎn)品和服務的生物技術公司。締碼現(xiàn)可提供CTLA-4靶點全系列產(chǎn)品與服務。產(chǎn)品包括活性蛋白、參照抗體和流式驗證單克隆抗體；服務涵蓋多種屬蛋白抗體定制服務、抗體人源化和親和力成熟服務。此外，為加速CTLA-4生物療法的開發(fā)，締碼還制備了CTLA-4靶點單B細胞種子庫，最快28天可獲得先導抗體分子；同時，我們目前已篩選出8個CTLA-4抗體分子，客戶第二天可以拿到分子進行功能評估驗證，詳情歡迎垂詢。
- 重組蛋白&抗體
| 產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
| 重組蛋白 | PME100017 | Human CTLA-4 Protein, mFc-His Tag |
| PME100479 | Human CTLA-4 Protein, hFc tag | |
| PME-M100010 | Mouse CTLA-4 Protein, hFc Tag | |
| 流式抗體 | DME100049 | Anti-CTLA-4 antibody(DM50); Rabbit mAb |
| DME100050 | Anti-CTLA-4 antibody(DM51); Rabbit mAb | |
| 參照抗體 | BME100022 | Anti-CTLA-4 (ipilimumab biosimilar) mAb |
| 生物素標記抗體 | DME100049B | Biotinylated Anti-CTLA-4 antibody(DM50); Rabbit mAb |
| DME100050B | Biotinylated Anti-CTLA-4 antibody(DM51); Rabbit mAb | |
| BME100022B | Biotinylated Anti-CTLA-4 (ipilimumab biosimilar) mAb |
- 締碼生物CTLA-4先導分子研究進展
