自身免疫疾病是一類(lèi)多樣且復(fù)雜的疾病，其特征是先天性免疫與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)協(xié)同導(dǎo)致的免疫失衡。由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、臨床表現(xiàn)高度異質(zhì)，使得治療極具挑戰(zhàn)性。盡管近年來(lái)在闡明關(guān)鍵發(fā)病過(guò)程和分子機(jī)制方面取得了一定進(jìn)展，但臨床治療仍面臨諸多難題。值得注意的是，自身抗體是多數(shù)自身免疫疾病最突出的標(biāo)志。這些異?？贵w由自反應(yīng)性B細(xì)胞產(chǎn)生，攻擊自身細(xì)胞和組織，從而引發(fā)器官炎癥與損傷。當(dāng)前自身免疫疾病的主要治療手段包括免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素以及生物制劑。CD20是一種主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，多項(xiàng)研究表明，異常B細(xì)胞在多種自身免疫疾病的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，使得CD20成為治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤及部分自身免疫疾病的重要靶點(diǎn)。
1. CD20結(jié)構(gòu)
CD20?(B淋巴細(xì)胞表面抗原) 是一種33–37kDa的非糖基化蛋白，屬于MS4A（膜跨越四結(jié)構(gòu)域A家族）蛋白家族。人類(lèi)CD20由位于染色體11q12.2的MS4A1基因編碼。CD20分子是一個(gè)由297個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，具有四個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域（Fig 1），在B細(xì)胞發(fā)育中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
Fig 1. The structure of CD20.[1]
2. CD20表達(dá)
CD20是一種跨膜糖蛋白，表達(dá)于B淋巴細(xì)胞表面。在生理狀態(tài)下，CD20在前B細(xì)胞階段和成熟B細(xì)胞階段中表達(dá)，但在B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞后則不再表達(dá)。在病理狀態(tài)下，CD20在諸如B細(xì)胞來(lái)源的淋巴瘤和白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤中高表達(dá)。
Fig 2. B cell developmental pathways and therapeutic targets.[2]
3. CD20在自身免疫疾病中的功能
自身免疫性疾病源于免疫系統(tǒng)功能紊亂，免疫細(xì)胞錯(cuò)誤地攻擊機(jī)體自身組織，進(jìn)而引發(fā)系統(tǒng)性疾病或局部損傷，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）。在多種自身免疫病的發(fā)病機(jī)制中，自身反應(yīng)性B細(xì)胞發(fā)揮了關(guān)鍵作用。大量臨床前和臨床研究表明，利用抗CD20單克隆抗體（mAb）進(jìn)行B細(xì)胞清除，可有效減緩疾病進(jìn)展。CD20并不直接參與免疫應(yīng)答中的抗原識(shí)別或抗體產(chǎn)生過(guò)程，但卻是B細(xì)胞活化、分化、增殖及鈣離子通道調(diào)控的重要分子。因此，靶向CD20的B細(xì)胞清除策略已被廣泛應(yīng)用于多種自身免疫性疾病的治療中。
以下是CD20在幾種主要自身免疫病中的功能與作用概述：
3.1 多發(fā)性硬化癥
多發(fā)性硬化癥（Multiple Sclerosis, MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性脫髓鞘疾病，傳統(tǒng)上被認(rèn)為主要由T細(xì)胞介導(dǎo)。但近年研究表明，B細(xì)胞在MS中同樣發(fā)揮關(guān)鍵作用，表現(xiàn)為腦脊液中髓鞘抗原的特異性抗體、B細(xì)胞濾泡樣結(jié)構(gòu)的形成等。CD20? B細(xì)胞可通過(guò)抗原呈遞、共刺激分子表達(dá)以及促炎因子（如IL-6、TNF-α）分泌增強(qiáng)T細(xì)胞反應(yīng)，從而加劇神經(jīng)炎癥。
3.2 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis, RA）是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)病，B細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生自身抗體（如抗CCP、類(lèi)風(fēng)濕因子）、活化T細(xì)胞、分泌促炎細(xì)胞因子參與炎癥反應(yīng)和關(guān)節(jié)破壞。CD20?B細(xì)胞在滑膜組織及外周血中富集，驅(qū)動(dòng)局部和系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。
3.3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡
系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種系統(tǒng)性自身免疫病，B細(xì)胞異?；罨?、異常抗體產(chǎn)生是其關(guān)鍵病理特征。盡管臨床上利妥昔單抗療效不一，但在難治性狼瘡腎炎或血液學(xué)系統(tǒng)受累患者中效果明顯。
3.4 銀屑病/銀屑病關(guān)節(jié)炎
銀屑?。≒soriasis）是一種以皮膚過(guò)度角化和免疫異常為特征的慢性疾病，銀屑病關(guān)節(jié)炎（Psoriatic Arthritis, PsA）則涉及關(guān)節(jié)炎癥。B細(xì)胞在疾病發(fā)病中的作用尚不如RA或MS明確，但在部分PsA患者中觀察到異常的B細(xì)胞活化。研究發(fā)現(xiàn)CD20?B細(xì)胞在PsA患者滑膜組織中表達(dá)升高，可能通過(guò)抗原呈遞與促進(jìn)Th17細(xì)胞活化參與病理過(guò)程。
抗CD20治療目前在銀屑病治療中尚處于早期研究階段，尚無(wú)獲批藥物，但為難治性患者提供潛在新策略。
3.5 干燥綜合征
干燥綜合征（Sj?gren’s Syndrome, SS）是一種以外分泌腺損傷為特征的自身免疫病，表現(xiàn)為口干、眼干。B細(xì)胞在唾液腺、淚腺中聚集，并產(chǎn)生抗SSA/Ro、SSB/La等自身抗體。CD20?B細(xì)胞在患者外周血和腺體組織中異常增殖和活化，與疾病活動(dòng)度和腫瘤轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)（如MALT淋巴瘤）密切相關(guān)。
4. CD20自免方向的藥物進(jìn)展
當(dāng)前靶向CD20的藥物在自身免疫疾病治療中不斷拓展，主要包括經(jīng)典的單克隆抗體如利妥昔單抗（已用于RA、SLE等）、改良型抗體如奧妥珠單抗（增強(qiáng)ADCC活性）和奧法妥木單抗（全人源化，已獲批用于MS），以及新興的雙特異性抗體如奧克利珠單抗和格菲妥單抗，具備更強(qiáng)的B細(xì)胞清除能力。同時(shí)，多款利妥昔單抗生物類(lèi)似藥也陸續(xù)上市，提升了患者的可及性和治療選擇。這些藥物通過(guò)靶向B細(xì)胞，在RA、SLE、MS等B細(xì)胞介導(dǎo)的疾病中展現(xiàn)出良好療效和廣闊前景。
4.1 多發(fā)性硬化癥
CD20靶向治療在多發(fā)性硬化癥中取得了重要突破，已成為治療復(fù)發(fā)型和進(jìn)展型MS的標(biāo)準(zhǔn)策略之一。Ocrelizumab（奧克利珠單抗）是首個(gè)被批準(zhǔn)用于MS治療的抗CD20單克隆抗體，是一種人源化IgG1抗體，具有強(qiáng)效的B細(xì)胞清除能力。Ocrelizumab于2017年獲FDA和EMA批準(zhǔn)，用于治療復(fù)發(fā)緩解型MS（RRMS）以及原發(fā)進(jìn)展型MS（PPMS），是迄今唯一被批準(zhǔn)用于PPMS的藥物。在關(guān)鍵性III期臨床試驗(yàn)（OPERA I/II和ORATORIO）中，Ocrelizumab顯著降低了年復(fù)發(fā)率、MRI病灶負(fù)荷以及殘疾進(jìn)展速度。
Ofatumumab（奧法妥木單抗）是另一種全人源化抗CD20單抗，其靶點(diǎn)位于CD20分子的近膜端區(qū)域，能更有效誘導(dǎo)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒作用（CDC）。它通過(guò)皮下注射給藥，患者可在家中自我注射，具備更高的便利性。Ofatumumab已于2020年獲得FDA批準(zhǔn)用于復(fù)發(fā)型MS（RMS），其III期ASCLEPIOS試驗(yàn)結(jié)果顯示療效不遜于Ocrelizumab，并具有更低的感染風(fēng)險(xiǎn)。
此外，Rituximab（利妥昔單抗）雖未正式獲批用于MS，但在臨床實(shí)踐中廣泛被“off-label”使用，特別是在北歐國(guó)家。研究發(fā)現(xiàn) Rituximab 對(duì)緩解MS復(fù)發(fā)、降低MRI活動(dòng)病灶及延緩殘疾進(jìn)展具有顯著效果，但因其為嵌合抗體，長(zhǎng)期使用存在免疫原性及過(guò)敏反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。
目前，一些改良型抗CD20抗體也正處于MS治療的臨床開(kāi)發(fā)階段，例如第二代抗體 Ublituximab（TG-1101），它是一種糖基化修飾減少的人源化單抗，在增強(qiáng)ADCC的同時(shí)減少副反應(yīng)。Ublituximab 在III期ULTIMATE I/II試驗(yàn)中展現(xiàn)出良好的臨床療效，現(xiàn)正申請(qǐng)監(jiān)管批準(zhǔn)。
4.2 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎
CD20單抗在RA中的應(yīng)用已較為成熟。Rituximab是目前唯一獲批用于RA的抗CD20抗體，于2006年獲得FDA批準(zhǔn)。其適應(yīng)癥為對(duì)一種或多種TNF-α抑制劑應(yīng)答不足的活動(dòng)性RA患者，需與甲氨蝶呤聯(lián)合使用。Rituximab可有效清除循環(huán)和滑液中的B細(xì)胞，從而降低自身抗體（如RF、ACPA）水平，減緩關(guān)節(jié)破壞進(jìn)程。多項(xiàng)III期試驗(yàn)（如REFLEX、MIRROR）證實(shí)其在改善RA病情活動(dòng)度和生活質(zhì)量方面的療效。
盡管 Ocrelizumab 和 Ofatumumab 曾分別在RA中進(jìn)行早期臨床試驗(yàn)（如Ocrelizumab的SCRIPT試驗(yàn)），但由于市場(chǎng)策略調(diào)整及療效未顯著優(yōu)于Rituximab，最終未在RA適應(yīng)癥上推進(jìn)注冊(cè)。此外，一些新一代CD20抗體，如 Obinutuzumab（奧妥珠單抗） 和 Veltuzumab（維妥珠單抗），目前尚無(wú)針對(duì)RA的后期臨床數(shù)據(jù)，仍處于探索階段。
4.3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡
由于B細(xì)胞在SLE發(fā)病機(jī)制中扮演核心角色，CD20抗體也被廣泛研究用于SLE治療。Rituximab 是最早進(jìn)入SLE臨床研究的CD20抗體之一，然而其在關(guān)鍵性III期試驗(yàn)（EXPLORER 和 LUNAR）中未能達(dá)到主要終點(diǎn)，導(dǎo)致其未被正式批準(zhǔn)用于SLE。然而，在臨床實(shí)踐中，Rituximab常作為難治性或器官受累嚴(yán)重（如狼瘡性腎炎、神經(jīng)系統(tǒng)狼瘡）患者的“off-label”治療手段。
為克服Rituximab在SLE中療效的局限，研究者開(kāi)發(fā)了更強(qiáng)效的新型抗體。Obinutuzumab 是一種Ⅱ型人源化CD20抗體，相較于Rituximab具有更強(qiáng)的B細(xì)胞清除能力和更少的內(nèi)吞。其在III期 NOBILITY 試驗(yàn)中表現(xiàn)出對(duì)狼瘡性腎炎患者蛋白尿改善和腎功能保護(hù)的積極療效，目前正在開(kāi)展更多驗(yàn)證性研究。
此外，Inebilizumab（anti-CD19） 也作為替代靶點(diǎn)正在研究，其能覆蓋更廣泛的B細(xì)胞亞群（包括漿母細(xì)胞），對(duì)SLE等B細(xì)胞主導(dǎo)性疾病可能具有額外優(yōu)勢(shì)。
4.4 干燥綜合征
B細(xì)胞活化是干燥綜合征的重要發(fā)病環(huán)節(jié)之一。Rituximab 是目前最常用于SS治療的抗CD20藥物，雖然尚未獲監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，但多項(xiàng)小型臨床試驗(yàn)（如TEARS、TRIPSS等）表明其對(duì)主觀干燥癥狀、疲勞和唾液腺功能具有一定改善作用。然而，因主要終點(diǎn)多未達(dá)標(biāo)，療效存在顯著個(gè)體差異，因此尚未進(jìn)入指南推薦。
正在開(kāi)發(fā)的新一代CD20抗體，如 Obinutuzumab 和 Veltuzumab，也已在小鼠模型或早期I/II期試驗(yàn)中用于SS研究，初步顯示出更強(qiáng)的組織滲透性和B細(xì)胞清除能力，尤其在唾液腺和淚腺中表現(xiàn)更佳。此外，部分研究聚焦于CD20?T細(xì)胞在SS中的功能作用，為拓展治療策略提供新思路。
5. CD20靶點(diǎn)相關(guān)產(chǎn)品
締碼現(xiàn)可提供一系列CD20靶點(diǎn)的現(xiàn)貨產(chǎn)品，產(chǎn)品包括重組蛋白、全長(zhǎng)膜蛋白，重組單克隆抗體，生物素/PE標(biāo)記抗體及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。我們還可以提供系統(tǒng)的服務(wù)，包括蛋白/抗體定制服務(wù)、抗體人源化、抗體親和力成熟、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株等。此外，我們已經(jīng)建立了CD20靶點(diǎn)的B細(xì)胞種子庫(kù)，可快速在20天內(nèi)篩選出客戶所需的先導(dǎo)抗體分子。如需了解更多詳情，歡迎垂詢。（400-006-0995 / 18062749453）
- CD20相關(guān)產(chǎn)品目錄
- 部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
① 重組蛋白
Human CD20 Protein, hFc Tag（Cat. No.PME100046）
Human CD20 Protein, hFc Tag on SDS-PAGE.
② 全長(zhǎng)膜蛋白
Human CD20 full length protein-MNP（Cat.No.FLP100026）
A. Negative Control 1: CD20 full length membrane nanoparticles samples were stained only with Goat anti-human lgG 488 secondary antibody; B. Negative Control 2: Control membrane nanoparticles samples were stained with anti-CD20 antibody (BME100160) at 2μg/mL, followed by Goat anti-human IgG 488 secondary antibody; C. Negative Control 3: CD20 full length membrane nanoparticles samples were stained with anti-CCR8 antibody (an irrelevant antibody) at 2μg/mL, followed by Goat anti-human IgG 488 secondary antibody.; D. CD20 full length membrane nanoparticles samples were stained with anti-CD20 antibody (BME100160) at 2μg/mL, followed by Goat anti-human IgG 488 secondary antibody.
CD20-MNP can bind with anti-CD20 monoclonal antibody (BME100160) and the EC50 is 128.8ng/ml.
Human CD20 full length protein-synthetic nanodisc（Cat. No.FLP100027）
③ 重組單克隆抗體
Anti-CD20 antibody(1F2), IgG1 Chimeric mAb（Cat. No.DMC101229）
Flow cytometry analysis with 1μg/mL Anti-CD20 (1F2) mAb on HEK293 cells transfected with human CD20 (Blue histogram) or HEK293 transfected with irrelevant protein (Red histogram).
④ Biosimilar參照抗體
Anti-CD20 (obinutuzumab biosimilar) mAb（Cat. No.BME100160）
Flow cytometry analysis with 2 μg/mL Anti-CD20 (obinutuzumab biosimilar) mAb (BME100160) on HEK293 cells transfected with Human CD20 protein (Blue histogram) or HEK293 transfected with irrelevant protein (Red histogram).
Anti-CD20 (rituximab biosimilar) mAb（Cat. No.BME100025）
Flow cytometry analysis with 2 μg/mL Anti-CD20 (rituximab biosimilar) mAb (BME100025) on HEK293 cells transfected with Human CD20 protein (Blue histogram) or HEK293 transfected with irrelevant protein (Red histogram).
⑤ 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
Hu_CD20 K562 Cell Line（Cat. No.CEL100018）
Flow cytometry analysis of human CD20 overexpression using Hu_CD20 K562 Cell Line (Cat. No. CEL100018) and Anti-CD20(obinutuzumab biosimilar) mAb (Cat. No. BME100160).
- CD20靶點(diǎn)先導(dǎo)抗體分子進(jìn)度
參考文獻(xiàn)
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