1. Q: DIMA產(chǎn)品的保質(zhì)期是多長?

? ? ? ? A: 產(chǎn)品的有效期是從您收到貨之日起并結(jié)合對應(yīng)COA上的推薦儲存時間進(jìn)行計(jì)算,在此期間,您使用中遇到任何問題,都可以隨時聯(lián)系我們。

2. Q: 收到蛋白質(zhì)或抗體后應(yīng)如何儲存?

? ? ? ? A:?DIMA所有的蛋白質(zhì)和抗體都以凍干形式運(yùn)輸,大多在-20℃至-80℃的環(huán)境下可以保存長達(dá)12個月。復(fù)溶后,產(chǎn)品可在4℃保存7-15天,或在-20℃保存2-3個月。如果在復(fù)溶后一個月內(nèi)不打算使用,建議分裝并儲存在 -80℃(避免反復(fù)凍融)。請注意,PE偶聯(lián)的產(chǎn)品只能在2℃-8℃下保存6個月。抗體長期儲存時,可加甘油至終濃度為50%,-20℃保存。

3. Q: 你們有產(chǎn)品在室溫下的長期儲存數(shù)據(jù)嗎?您是否可以對您的凍干產(chǎn)品在室溫下進(jìn)行長期穩(wěn)定性研究(6個月至一年),并將數(shù)據(jù)分享給我?

? ? ? ?A: 我們的蛋白質(zhì)和抗體都以凍干形式在-20℃至-80℃儲存可長達(dá)12個月。我們的穩(wěn)定性測試數(shù)據(jù)包括20℃(正常)和37℃(極端)3天,測試數(shù)據(jù)證明了我們的產(chǎn)品在長期儲存后的穩(wěn)定性。雖然我們沒有在室溫下保存12個月的蛋白質(zhì)或抗體樣品,但如果需要,我們可以提供保存12個月以上的樣品用于活性測試。請說明您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊员氵M(jìn)一步幫助。

4. Q: 你們能在12個月內(nèi)每月測試一次蛋白質(zhì)嗎?

? ? ? ?A: 對于12個月以上的月度測試,我們將需要12份樣品(10ug)用于SDS-PAGE。成本包括產(chǎn)品定價(12份的總價)和額外測試的服務(wù)費(fèi)(12 * 350元= 4200元)。需要預(yù)付費(fèi)用,收到后我們每月提供測試數(shù)據(jù),為期12個月。我們也可以根據(jù)您的要求寄送剩余的蛋白質(zhì),運(yùn)費(fèi)需由您承擔(dān)。

5. Q: 我在一年前在貴公司訂購了蛋白產(chǎn)品,后期希望再次訂購?fù)慌蔚牡鞍桩a(chǎn)品,締碼生物是如何保證同一批次蛋白的質(zhì)量穩(wěn)定性的?

? ? ?A:凍干粉狀態(tài)下的蛋白質(zhì)和抗體通常在我們的標(biāo)準(zhǔn)保存條件下非常穩(wěn)定。根據(jù)我們對許多蛋白質(zhì)的測試數(shù)據(jù)和客戶反饋,我們發(fā)現(xiàn),只要按照我們推薦的條件保存,產(chǎn)品通常能夠保持穩(wěn)定達(dá)5到6年。同時我們會定時對老批次蛋白產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)控檢測以確保所有產(chǎn)品的質(zhì)量保證和穩(wěn)定應(yīng)用。締碼所有蛋白產(chǎn)品,從客戶收到貨物之日起1年內(nèi),客戶在按照我們COA要求的保存條件下保存和使用,若在此期間發(fā)現(xiàn)任何質(zhì)量問題,我們將提供全力的售后支持。

COA中提到的1年保質(zhì)期是指客戶收到貨物后,在按照規(guī)定的保存條件下,產(chǎn)品能夠保證質(zhì)量的保證期。以下是我們常規(guī)庫存蛋白的質(zhì)檢案例展示:

The biological activity evaluation on different production lot of proteins (freshly prepared (PH25A1001) Vs lyophilized format stored in -20C for more than five years (PH20H1801). The lot-to-lot variation for recombinant human CTLA-4 (Cat# PME100479) is minimal through biological activity evaluation test.

  1. Q: 凍干產(chǎn)品如何復(fù)溶?復(fù)溶體積如何計(jì)算,是否一定要按照凍干前濃度來計(jì)算復(fù)溶體積?

? ? ? ?A: 隨貨COA上有凍干前的產(chǎn)品濃度和推薦稀釋體積;過低或者過高的溶劑濃度都可能會影響蛋白的穩(wěn)定性;您拿到產(chǎn)品使用前,務(wù)必離心后加無菌水重懸。我們的蛋白質(zhì)在1X PBS中凍干,pH值為7.4,通常含有5% – 8%的海藻糖作為保護(hù)劑。我們建議根據(jù)產(chǎn)品凍干前的濃度復(fù)溶,使用更大體積的水可能會導(dǎo)致溶液中的鹽濃度降低,雖然這通常是可以的,但我們建議根據(jù)您的具體實(shí)驗(yàn)要求來確定。

  1. Q: 關(guān)于產(chǎn)品功能的驗(yàn)證,哪些分析是可用的?

? ? ? ?A: 目前我們部分產(chǎn)品做的驗(yàn)證只有ELISA或流式細(xì)胞術(shù)檢測,其他活動分析數(shù)據(jù)目前可能無法獲得,請參考我們網(wǎng)站上的驗(yàn)證數(shù)據(jù)圖表以獲取最新信息。

  1. Q: 不同批次的DIMA產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何?

? ? ? ?A:?針對蛋白和抗體產(chǎn)品,締碼內(nèi)部開發(fā)了高效穩(wěn)轉(zhuǎn)株開發(fā)流程,極大縮小了產(chǎn)品生產(chǎn)批件差,并且締碼嚴(yán)格質(zhì)量管理體系可以保證產(chǎn)品質(zhì)量;您可以放心使用,使用中遇到任何問題,都可以隨時聯(lián)系我們。

  1. Q: 我們產(chǎn)品的內(nèi)毒素含量是多少?

? ? ? ?A:?Dima產(chǎn)品生產(chǎn)的環(huán)境嚴(yán)格控制內(nèi)毒素引入,我們的大多數(shù)蛋白質(zhì)和抗體都是用HEK293細(xì)胞(一種人類細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng))產(chǎn)生的,而不是用大腸桿菌系統(tǒng)或其他天然資源。大多數(shù)內(nèi)毒素問題都與大腸桿菌制備的蛋白質(zhì)有關(guān)。因此,常規(guī)內(nèi)毒素檢測不是我們標(biāo)準(zhǔn)程序的一部分。然而,我們可以向您保證,我們的蛋白質(zhì)的內(nèi)毒素水平低于2 EU/μg (LAL)。

  1. Q: 為什么凍干產(chǎn)品的運(yùn)輸溫度為室溫?

? ? ? ?A: 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明了DIMA凍干產(chǎn)品在環(huán)境溫度下的優(yōu)異穩(wěn)定性。國內(nèi)快遞運(yùn)輸2-3天的運(yùn)輸周期不會對產(chǎn)品活動產(chǎn)生不利影響。

  1. Q: 海藻糖在凍干產(chǎn)品中的濃度是多少?它會影響它們的功能嗎?

? ? ? ?A:?在凍干前,我們的產(chǎn)品添加了5%~8%質(zhì)量/體積的海藻糖溶液,以確保凍干過程中的穩(wěn)定性。凍干后,我們通過SDS-PAGE等方法驗(yàn)證穩(wěn)定性,并通過ELISA或FACS Binding等檢測驗(yàn)證功能性。您可以放心使用我們的產(chǎn)品。

  1. Q: Procline 300可以加到緩沖液中嗎?

? ? ? ?A: 一般凍干產(chǎn)品不含Procline 300,添加后不適合凍干過程。Procline 300是一種防腐劑,但其毒性使其不適合用于凍干產(chǎn)品。如果您喜歡液體形式的產(chǎn)品,我們可以添加0.1% Procline 300。對于定制緩沖器,服務(wù)費(fèi)將根據(jù)與目錄價格的偏差單獨(dú)計(jì)算。目前我們的產(chǎn)品全部為凍干產(chǎn)品,不含疊氮化鈉、硫柳汞、2-巰基乙醇;它們只有5% – 8%的海藻糖。

  1. Q: 你能把蛋白質(zhì)的氨基酸序列發(fā)給我們嗎?

? ? ? ?A: 我們的蛋白質(zhì)的氨基酸序列可根據(jù)要求提供。請隨時與我們聯(lián)系,我們將及時提供所需的信息。

  1. Q: 你們提供蛋白質(zhì)生產(chǎn)的定制服務(wù)嗎?

? ? ? ?A:?是的,我們可以根據(jù)您的具體需求提供定制的蛋白質(zhì)生產(chǎn)服務(wù)。我們將根據(jù)您的序列要求與您合作設(shè)計(jì)項(xiàng)目。如果您對定制項(xiàng)目感興趣,請告訴我們,我們可以提供有關(guān)定價和時間表的詳細(xì)信息。我們的專業(yè)團(tuán)隊(duì)確保提供高質(zhì)量的蛋白質(zhì),滿足您的研究要求。如有任何其他問題或幫助,請隨時與我們聯(lián)系。

1. Q: 你能告訴我用于測定抗體濃度的消光系數(shù)嗎?

? ? ? A: 由于抗體的復(fù)雜性較高,我們通常使用機(jī)器默認(rèn)的消光系數(shù)用于測定,我們的全長抗體(HC+LC)的消光系數(shù)為0.735,濃度計(jì)算公式為A280/0.735。一般來說,預(yù)測消光系數(shù)與UV和Bradford測定的濃度一致,我們已經(jīng)驗(yàn)證了這種一致性。

2. Q: 你能提供更多關(guān)于你網(wǎng)站上提到的抗體同型的信息嗎?為什么你的抗體來自兔(宿主品種:兔),但抗體同型:兔/人Fc嵌合IgG1?

? ? ? A: 這種抗體是嵌合形式的。最初是在兔子身上開發(fā)的,然后我們?nèi)サ袅送每沟腇c結(jié)構(gòu)域,用人抗的IgG1 Fc取而代之。因此,它被稱為嵌合抗體,其中Fab部分來自兔源,F(xiàn)c部分來自人源。這種創(chuàng)新的設(shè)計(jì)結(jié)合了兔抗生產(chǎn)的優(yōu)勢和人抗Fc區(qū)的兼容性。對于二抗的使用,我們推薦山羊抗人HRP或其他綴合物。

3. Q: 你們的抗-DXD抗體會結(jié)合exatecan mesylate嗎?

? ? ?A: 我們的抗-DXD抗體最初是使用DXD載體毒素開發(fā)的,Exatecan Mesylate與DXD密切相關(guān),但并不完全相同,它們之間存在結(jié)構(gòu)差異,我們的抗-DXD抗體不會結(jié)合exatecan mesylate。

1. Q: Nanodisc蛋白使用哪些材料合成?

? ? ? ?A: 我們使用在公司內(nèi)部合成的合成納米圓盤。然而,關(guān)于我們納米圓盤組成的具體細(xì)節(jié)是專有和保密的.

2. Q: 是否可以購買空的納米圓盤?

? ? ? ?A: 目前,我們沒有空的納米片可供購買。但是我們可以提供為特定靶蛋白設(shè)計(jì)的納米盤。

3. Q: 在凍干和溶解后是否檢測了蛋白質(zhì)/納米圓盤的功能?

? ? ? ?A: 我們所有的Nanodisc蛋白都經(jīng)過了全面的凍干和測試程序。我們網(wǎng)站上的數(shù)據(jù)來自于凍干和復(fù)溶過程后的蛋白質(zhì)。

4. Q: 你們?yōu)闃?biāo)準(zhǔn)的Nanodisc蛋白產(chǎn)品提供額外的測試嗎?

? ? ? ?A: 我們的Nanodisc蛋白已經(jīng)用抗FLAG標(biāo)簽抗體進(jìn)行了驗(yàn)證。如果有合適的抗體,我們可以嘗試使用其他抗體進(jìn)行驗(yàn)證。但是對于某些產(chǎn)品,我們的庫存中可能沒有合適的抗體。如果您有任何建議,請與我們分享,以便我們可以探索使用推薦抗體的可能性。

5. Q: 你們提供定制的Nanodisc開發(fā)嗎?

? ? ? ?A: 我們可以為超出我們目前范圍的目標(biāo)提供定制的Nanodisc開發(fā)。為了提供準(zhǔn)確的成本計(jì)算和時間表,我們需要關(guān)于項(xiàng)目目標(biāo)和規(guī)模的具體細(xì)節(jié)。請分享您的具體要求,以便我們提供準(zhǔn)確的估計(jì)和時間表。

對于新的靶點(diǎn),我們通常使用表達(dá)cDNA克隆進(jìn)行測試運(yùn)行(250mL培養(yǎng)體積)。從測試運(yùn)行中獲得的蛋白質(zhì),從ng到100ug不等,將被發(fā)送給客戶。實(shí)際成本和時間取決于具體的項(xiàng)目要求。例如,與具有4個跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)(如CLDN2)相比,具有12個跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)(如MDR1 (Human MDR-1全長蛋白-synthetic nanodisc- DIMA Biotechnology))在測試中會產(chǎn)生更高的成本。

此外,定制項(xiàng)目的任何其他考慮因素,例如獨(dú)特的規(guī)格或特殊的處理說明,都可以根據(jù)項(xiàng)目細(xì)節(jié)進(jìn)行討論。如果客戶沒有提供表達(dá)cDNA克隆,我們將單獨(dú)收費(fèi),這種情況下我們將把DNA克隆寄給客戶。

6. Q: Nanodisc樣品中有多個條帶.

? ? ? ?A: 我們正在積極優(yōu)化我們的條件,以獲得更好的蛋白質(zhì)效果。然而,根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),由于磷酸化和糖基化等翻譯后修飾(PTMs),蛋白質(zhì)可以表現(xiàn)出較高分子量的條帶,或者由于細(xì)胞過程或樣品制備過程中的切割而表現(xiàn)出較低分子量的條帶。因此,我們建議查閱文獻(xiàn),看看是否報(bào)道了該特定蛋白的多個條帶。如果您遇到任何關(guān)于該蛋白的參考數(shù)據(jù),請隨時與我們分享,以便我們進(jìn)一步優(yōu)化。

7. Q: VLP或MNP,Nanodisc一般80ml可以獲得多少蛋白?

? ? ? ?A: VLP要看靶點(diǎn),有一些靶點(diǎn)VLP表達(dá)不太好,正常表達(dá)的差不多在1mg左右;MNP通常都有在2-3mg左右;Nanodisc產(chǎn)量較低,大概在μg級別,所以相對來說成本較高,但是蛋白純度也相對較高,是具有天然構(gòu)象的純化目標(biāo)蛋白。

8. Q: Nanodisc蛋白質(zhì)和相應(yīng)的脂質(zhì)和聚合物的總量是多少?你們用的蛋白質(zhì)測量方法是什么?

? ? A: 對于Nanodisc蛋白的測量,我們使用標(biāo)準(zhǔn)的BCA定量方法進(jìn)行測定。試管上顯示的量是不包括脂質(zhì)和合成聚合物在內(nèi)的目標(biāo)蛋白量。合成納米盤上的脂質(zhì)和聚合物的分子量平均在146kDa左右。因此,這兩種組分的量可以用以下公式計(jì)算:脂質(zhì)+合成聚合物=蛋白質(zhì)X的量(146/目標(biāo)蛋白的分子量)。

9. Q: 空納米盤的共聚物復(fù)合物的分子量是多少?

? ? ?A: 平均分子量約為146kDa。詳細(xì)的計(jì)算可參考文獻(xiàn)(Hall SCL.,et al. 2018)。

10. Q: 您的客戶是否在展示實(shí)驗(yàn)中使用了nanodisc膜蛋白?您推薦哪種固定方法?根據(jù)Dima Biotech的網(wǎng)站,nanodisc膜蛋白已經(jīng)在SPR和ELISA應(yīng)用中進(jìn)行了測試——在這些應(yīng)用中,你們是如何固定的?

? ? ? ? A: 關(guān)于固定,我們通常使用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA包被方法,效果很好。我們也嘗試過夾心法,即先包被抗FLAG抗體,然后再加入納米盤蛋白。這兩種方法都很有效。然而,有幾個案例中,某些nanodisc蛋白在使用構(gòu)象表位抗體時可能不適用于直接包被法。對于像anti-FLAG這樣的線性表位,無論是直接包被法還是間接夾心法,都能有效地發(fā)揮作用。

11. Q: 你們提供生物素化的nanodisc膜蛋白嗎?

? ? ? ? A: 目前我們不提供標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品形式的蛋白。不過,我們已經(jīng)開發(fā)了相關(guān)技術(shù)平臺,可以為您提供定制服務(wù)。

12. Q: 請?zhí)峁┯嘘P(guān)你們基于聚合物的nanodisc的穩(wěn)定性、儲存條件和緩沖液兼容性的更多信息。例如,它們是否兼容含有表面活性劑的緩沖液,如Tween-20,或者低濃度有機(jī)溶劑,如DMSO或乙醇?在使用基于聚合物的nanodisc膜蛋白開發(fā)檢測時,還有其他限制嗎?

? ? ? ? A: 我們的共聚物是基于SMA的技術(shù),洗滌劑可能會影響nanodisc。然而,在ELISA實(shí)驗(yàn)中,我們使用了低濃度的Tween-20緩沖液,效果還不錯。關(guān)于反應(yīng)緩沖液的pH值,我們建議不低于pH5.0,因?yàn)镾MA共聚物對低pH條件敏感。高濃度的二價陽離子也會影響基于SMA的共聚物,我們建議不使用超過5mM的二價陽離子濃度。我們尚未測試在DMSO或乙醇中的實(shí)驗(yàn)條件。

13.?Q: Nanodisc的純度和純化方式

? ? ? ? A: 我們采用M2親和純化方法純化蛋白。根據(jù)SDS-PAGE凝膠,蛋白的純度估計(jì)在85%左右,有些蛋白在其主要產(chǎn)物帶上方有微弱的高分子量條帶,這是跨膜蛋白SDS-PAGE凝膠的正常特征。這些高分子量條帶可能是由多聚體或PTM引起的。如果需要,我們可以進(jìn)行WB試驗(yàn)來驗(yàn)證這些高分子量條帶的真實(shí)性。

14.?Q: 你們的Nanodisc蛋白在ELISA及WB實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中需要注意哪些問題?

? ? ? ? A:?由于純化過程中抗flag M2抗體的輕/重鏈輕微脫落,我們無法使用抗小鼠二抗對Flag-tag nanodisc進(jìn)行間接ELISA或WB實(shí)驗(yàn)。

15. Q: 納米盤(Nanodisc)結(jié)構(gòu)能耐受二價金屬離子嗎?

? ? ? ? A: 納米盤結(jié)構(gòu)是否能耐受二價金屬離子,不僅取決于金屬離子的濃度,還取決于添加方式。如果一次性加入氯化鎂(MgCl?)或其他二價金屬離子,使最終濃度達(dá)到 5 mM,可能會發(fā)生沉淀。然而,如果金屬離子逐步加入,即使最終濃度達(dá)到 5 mM,也可以避免沉淀。通常情況下,只要添加方式得當(dāng),濃度低于 5 mM 不會引起沉淀。

16. Q: Nanodisc 是否對去污劑敏感?在含有去污劑的溶液中是否穩(wěn)定

? ? ? ? A: Nanodisc 對低濃度的去污劑具有一定耐受性,例如 0.1% Tween-20,該濃度通常用于實(shí)驗(yàn)過程中的洗滌緩沖液。然而,較高濃度的去污劑可能會影響 Nanodisc 的穩(wěn)定性。因此,建議使用低濃度去污劑,以維持其最佳穩(wěn)定性。

17. Q: Strep-Flag 雙標(biāo)簽 Nanodisc 蛋白的標(biāo)簽序列是什么?

? ? ? ? A: 該 Nanodisc 蛋白同時包含 FLAG 標(biāo)簽 和 Twin-Strep 標(biāo)簽:

? ? ? ? ? ? ? FLAG 標(biāo)簽序列:DYKDDDDK

? ? ? ? ? ? ?Twin-Strep 標(biāo)簽序列:SAWSHPQFEKGGGSGGGSGGSAWSHPQFEK

? ? ? ? ? ? ?其中,F(xiàn)LAG 標(biāo)簽 為單一標(biāo)簽,而 Twin-Strep 標(biāo)簽 由兩個 Strep 標(biāo)簽通過連接序列組合而成。

18. Q: 納米盤的尺寸是多少?

? ? ? ? A: 該納米盤的直徑約為10–15nm,厚度與脂雙層相似,大約為4–5nm。

19. Q: 納米盤的脂質(zhì)組成是什么?

? ? ? ? ?A: 由于我們的合成納米盤是由天然膜構(gòu)建而成,這與傳統(tǒng)的MSP技術(shù)不同,因此其脂質(zhì)組成與我們所使用的生產(chǎn)細(xì)胞系—HEK293細(xì)胞的原始脂質(zhì)完全一致。

20. Q: 如果購買10 μg 的Nanodisc產(chǎn)品,是否指的是目標(biāo)蛋白的含量?

? ? ? ? ?A: 是的。我們使用BCA法(Bicinchoninic Acid Assay)對蛋白質(zhì)含量進(jìn)行定量,該方法不受脂質(zhì)和合成聚合物的干擾,因此所得數(shù)值代表目標(biāo)蛋白的真實(shí)質(zhì)量。

?
?
  1. Q: 待測抗體與 AME100002 按照質(zhì)量比稀釋混合,得到 Ab-AME100002 復(fù)合物,標(biāo)記完的抗體是否可以保存,保存條件是什么?

? ? ? ? A: 我們沒有進(jìn)行具體的測試,建議您現(xiàn)配現(xiàn)用。

  1. Q: AME100001試劑的原理以及如何算出內(nèi)吞率?

? ? ? ?A: DiTagTM?pH-sensitive IgG labeling reagent利用pH敏感的熒光標(biāo)記的Fc結(jié)合蛋白與來自不同物種的IgG抗體結(jié)合,從而形成熒光標(biāo)記的抗體-試劑復(fù)合物??贵w內(nèi)化后,周圍pH變?yōu)樗嵝?,顯著增強(qiáng)抗體-試劑復(fù)合物的熒光信號。熒光強(qiáng)度可作為判斷抗體內(nèi)化活性的指標(biāo),通過測量熒光信號的強(qiáng)度,研究人員可以評估抗體內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞的效率。陽性率需要根據(jù)客戶的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)去進(jìn)行計(jì)算,陽性率計(jì)算的是內(nèi)吞陽性細(xì)胞的百分比。

  1. Q: DiTagTMpH-sensitive IgG labeling reagent, MFI能達(dá)到多少?不同細(xì)胞信號值差多少?有些細(xì)胞會不會檢測不到?

? ? ? ?A: MFI值與不同的細(xì)胞,不同的流式檢測方式都有關(guān)系,不同細(xì)胞類型的MFI值可能不同,抗原低表達(dá)的細(xì)胞是有測不出來的風(fēng)險。DIMA Biotechnology的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,F(xiàn)ITC的MFI值為3*10^4。

  1. Q: AME100001和AME100002的區(qū)別?

? ? ? ?A:?主要區(qū)別在于它們對不同IgG抗體的親和力,更多信息請參考下表。

SpeiesImmunoglobulinAME100001AME100002
HumanIgG(normal)++++++++
IgG1++++++++
IgG2++++++++
IgG3-++++
IgG4++++++++
IgM--
IgA--
IgE--
IgD--
Fab++++
κ light chains--
L light chains--
ScFv++-
MouseIgG1+++++
IgG2a++++++++
IgG2b++++++
IgG3+++++
RatIgG1-+
IgG2a-++++
IgG2b-++
IgG2c+++
BovineIgG++++++
CatIgG++++-
ChickenIgG-+
DogIgG+++++++
GoatIgG+/-++
Guinea PigIgG++++++
HamsterIgG+++
HorseIgG++++++
PigIgG++++++
RabbitIgG+++++++
SheepIgG+/-++