2023年12月7日， AbelZeta宣布與阿斯利康達(dá)成協(xié)議，共同開發(fā) C-CAR031，一種針對肝細(xì)胞癌 (HCC)的靶向Glypican-3 (GPC3)嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)療法。根據(jù)協(xié)議條款，AbelZeta將從阿斯利康獲得預(yù)付款，用于C-CAR031在中國的共同開發(fā)和商業(yè)化。AbelZeta還有資格獲得其全球開發(fā)的里程碑付款和特許權(quán)使用費(fèi)。該藥物由阿斯利康在中國境外獨(dú)家開發(fā)、制造和商業(yè)化。那GPC3為何會受藥企大佬阿斯利康的青睞呢？目前國內(nèi)外又有哪些藥企布局了靶向GPC3的免疫療法？

1、GPC3蛋白結(jié)構(gòu)和表達(dá)特性

GPC3，又名DGSX、GTR2-2、MXR7、OCI-5，是由GPC3基因編碼的硫酸乙酰肝素 (HS)蛋白聚糖家族的成員。GPC3基因位于染色體Xq26上，其編碼的蛋白包含一個(gè)580個(gè)氨基酸的核心蛋白和兩條位于C-端的HS鏈。GPC3核心蛋白通過糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨連在細(xì)胞膜表面上，可被切割成大約40KDa的N端可溶性蛋白（sGPC3）和30KDa C端膜蛋白。切割后的sGPC3可以從癌細(xì)胞釋放到循環(huán)中（Figure 1）。

Figure 1. The structure of GPC3 [1]

GPC3在人類胚胎中廣泛表達(dá)，并通過涉及胰島素樣生長因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）或刺猬蛋白（Hh）信號通路的機(jī)制在形態(tài)發(fā)生和生長中發(fā)揮重要作用 [2] [3]。GPC3可在胚胎18至30周的胎兒肝臟中檢測到，但在任何正常成人肝組織，甚至脂肪肝，肝硬化，肝炎，或肝損傷等肝臟病理組織中均很少看到GPC3蛋白的表達(dá)[4] [5]。關(guān)于這一表達(dá)特性最早是由Hsu等人在1997年的研究中報(bào)道出來的，研究表明大多數(shù)HCC中GPC3的mRNA和蛋白水平比正常肝癌、膽管癌和肝癌轉(zhuǎn)移的程度更高 [6]。而這一表達(dá)特性讓GPC3被視為理想的肝細(xì)胞癌（HCC）診斷和治療靶點(diǎn)。

2、GPC3與肝細(xì)胞癌

GPC3除了作為HCC診斷標(biāo)志，還在HCC的疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。有研究表明，GPC3可以通過其HS側(cè)鏈結(jié)合Wnt和FGF等信號蛋白或生長因子來參與并促進(jìn)HCC生長和侵襲。GPC3蛋白在肝細(xì)胞癌中的作用機(jī)制并不確定。有研究表明GPC3是通過經(jīng)典 Wnt/β-catenin 信號途徑發(fā)揮作用，激活Wnt信號途徑使Wnt基因高表達(dá), 從而促進(jìn)腫瘤的生長。

Figure 2. The diagram of possible GPC3-mediated signaling pathway in HCC progression [7]

3、針對GPC3靶點(diǎn)的治療策略

GPC3靶向藥物的研究歷程并不順利。單一的GPC3單克隆抗體的臨床效果不佳，與對照組相比在患者的總生存期和無進(jìn)展生存期上均沒有顯著差異。目前臨床上針對GPC3的藥物研發(fā)主要集中在臨床I期，涉及的藥物類型包括抗體藥物和細(xì)胞治療，其中以CAR-T療法的臨床試驗(yàn)數(shù)最多。

Figure 3. the diagram of GPC3 targeted therapy for HCC [8]

3.1 抗體藥

• Codrituzumab（單抗）

Codrituzumab，又稱為GC33，RO5137382，是由中外制藥開發(fā)的一款靶向GPC3的人源化單克隆抗體。GC33是首個(gè)針對GPC3開發(fā)的人源化重組單克隆抗體，在2016年發(fā)表的2期臨床試驗(yàn)（NCT01507168）結(jié)果中顯示，在肝細(xì)胞癌（HCC）二線患者中，Codrituzumab單獨(dú)使用時(shí)臨床效果并不理想。2021年6月，中外制藥重新啟動了關(guān)于codrituzumab的I期試驗(yàn)（NCT04928677），繼續(xù)挖掘其在實(shí)體瘤中的臨床價(jià)值，目前該項(xiàng)臨床試驗(yàn)仍處在招募狀態(tài)。

• ERY974（雙抗）

ERY974，又稱為ERY101EG，是中外制藥在GPC3單抗的基礎(chǔ)上衍生出的一款GPC3/CD3雙特異性抗體。ERY974抗體可以識別GPC3和CD3雙抗原，在T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間構(gòu)成了免疫突觸，介導(dǎo)T細(xì)胞殺傷GPC3過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞。目前，針對ERY974有一項(xiàng)新的I期臨床研究（NCT05022927），用于評估對晚期肝細(xì)胞癌患者實(shí)施ERY974, Tocilicumab (IL-6R), Atezolizumab (PD-L1), 和 Bevacizumab (VEGF-A) 聯(lián)合用藥的安全耐受性和初步療效。2022年9月Sano, Y等人在Nature Communications雜志發(fā)表了ERY974與化藥聯(lián)合用藥的結(jié)果 [9]，結(jié)果顯示ERY974和化療結(jié)合起來可以更有效地提高ERY974在非發(fā)炎腫瘤中的療效，進(jìn)一步驗(yàn)證了ERY974的聯(lián)合治療策略的研發(fā)方向。

• CM350（雙抗）

CM350是基于康諾亞專有nTCE雙特異性抗體平臺開發(fā)的一款GPC3xCD3雙特異性抗體。CM350通過同時(shí)靶向腫瘤細(xì)胞的GPC3及T細(xì)胞的CD3，激活T細(xì)胞并將其重定向至靶向腫瘤細(xì)胞，從而完成腫瘤細(xì)胞的清除，目前針對的適應(yīng)癥為實(shí)體瘤，尤其是肝細(xì)胞癌。CM350 現(xiàn)處于Ⅰ期臨床的劑量遞增階段。

3.2 CAR-T療法

• BOXR1030

BOXR1030是由SOTIOBiotech基于專有的BOXR?平臺，用于治療表達(dá)GPC3的各種實(shí)體瘤。BOXR1030的結(jié)構(gòu)如下圖所示，它是一款人源化GPC3靶向scFv、4-1BB共刺激域和CD3ζ信號域的二代CAR。同時(shí)，利用P2A序列連接密碼子優(yōu)化的GOT2，旨在評估T細(xì)胞代謝對CAR-T細(xì)胞功能的影響，而后再通過γ逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)生成CAR-T細(xì)胞。臨床前研究表明，與傳統(tǒng)的GPC3 CAR-T細(xì)胞相比，在缺氧和低葡萄糖條件下，BOXR1030 T細(xì)胞增殖得到改善，而且具有更好的腫瘤殺傷能力；此外，在動物分離出的腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中，與對照細(xì)胞相比，BOXR1030對功能障礙的抵抗力更強(qiáng)，并且衰竭的標(biāo)志物更少。BOXR1030的初始適應(yīng)癥包括肝細(xì)胞癌、肺鱗狀細(xì)胞癌和粘液樣/圓形細(xì)胞脂肪肉瘤，目前已進(jìn)入臨床，正在進(jìn)行1/2期DUET-01臨床試驗(yàn)（NCT05120271），該項(xiàng)臨床試驗(yàn)正處于招募狀態(tài)。

Figure 4. The structure of BOXR1030

• CT011&CT0180&CT0181

CT011&CT0180&CT0181均是由科濟(jì)藥業(yè)開發(fā)的GPC3 CAR-T產(chǎn)品，針對的適應(yīng)癥都是肝細(xì)胞癌（HCC），區(qū)別在于CAR的設(shè)計(jì)。

CT011是一種用于治療HCC的自體GPC3細(xì)胞候選產(chǎn)品。CT011曾于2019年獲得國家藥監(jiān)局的IND批準(zhǔn)，用于治療GPC3陽性實(shí)體瘤患者，這是中國首個(gè)針對實(shí)體瘤的CAR-T細(xì)胞療法的IND，科濟(jì)藥業(yè)已在中國完成了這項(xiàng)的I期臨床試驗(yàn)的患者入組（NCT03884751）。2024年1月15日，中國藥品監(jiān)督管理局又批準(zhǔn)了該療法用于治療手術(shù)切除后出現(xiàn)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的GPC3陽性的IIIa期肝細(xì)胞癌患者的IND申請。

CT0180是一種表達(dá)靶向GPC3抗體及T細(xì)胞受體融合蛋白的自體T細(xì)胞產(chǎn)品。臨床前研究表明，在小鼠異種移植模型中，CT0180可有效識別和殺死GPC3陽性肝細(xì)胞癌細(xì)胞并大幅抑制HCC腫瘤生長。目前正處于一項(xiàng)開放標(biāo)簽、劑量遞增的I期臨床試驗(yàn)（NCT04756648），旨在評估CT0180在GPC3陽性的晚期HCC患者中的安全性、初步療效和細(xì)胞藥代動力學(xué)。該試驗(yàn)正處于招募狀態(tài)。

CT0181是一種表達(dá)靶向GPC3抗體與T細(xì)胞受體融合蛋白及共表達(dá)IL-7細(xì)胞因子的自體T細(xì)胞產(chǎn)品。臨床前研究表明，與GPC3 CAR-T細(xì)胞相比，CT0181在具有低細(xì)胞因子釋放的實(shí)體瘤異種移植物中顯示出卓越的抗腫瘤功效、T細(xì)胞持久性及免疫記憶。目前一項(xiàng)I期臨床試驗(yàn)（NCT04973098）已經(jīng)在中國啟動，旨在評估CT0181治療肝細(xì)胞癌的安全性和療效。

• B010-A

B010-A是由上海醫(yī)藥研發(fā)的一款GPC3靶向CAR-T療法。與傳統(tǒng)CAR-T療法相比，B010-A中新增了SPH-Engine結(jié)構(gòu)，可促進(jìn)CAR-T殺傷活性，同時(shí)可以促進(jìn)CAR-T細(xì)胞體內(nèi)循環(huán)，用于晚期實(shí)體瘤的治療。臨床前研究表明，B010-A具有更優(yōu)的體內(nèi)外抗腫瘤活性和更好的安全性。目前有一項(xiàng)早期I期臨床試驗(yàn)（NCT05070156）已在中國啟動。這是一項(xiàng)開放標(biāo)簽、單組研究，旨在觀察B010-A治療晚期肝細(xì)胞癌的安全性和耐受性。

• TAK-102

TAK-102，又稱為NIB102，是武田與Noile-Immune Biotech聯(lián)合開發(fā)的一款GPC3靶向CAR-T療法。該CAR-T產(chǎn)品是一種表達(dá)靶向GPC3抗體及IL-7和CCL19融合蛋白的自體T細(xì)胞產(chǎn)品。這種新型 CAR -T 療法的設(shè)計(jì)不僅引起GPC3靶向CAR T細(xì)胞介導(dǎo)的直接細(xì)胞毒性，還可以通過IL-7和CCL19的表達(dá)為CAR- T細(xì)胞提供裝甲效應(yīng)。在SITC-2022年會上公布的中期臨床數(shù)據(jù)顯示：截至2022年3月25日，接受TAK-102治療的4例患者中均未出現(xiàn)劑量限制性毒性、細(xì)胞因子釋放綜合征或神經(jīng)毒性。2例達(dá)到病情穩(wěn)定（SD），并伴隨腫瘤標(biāo)志物如AFP、LDH的變化。在較低劑量水平下，TAK-102表現(xiàn)出良好的細(xì)胞動力學(xué)行為，且存在劑量效應(yīng)。劑量遞增研究還在進(jìn)行中（NCT04405778）。

• Ori-C101

Ori-C101是由原啟生物開發(fā)的一款靶向GPC3嵌合抗原受體自體T細(xì)胞。Ori-C101具有高特異性和高親和力的靶向GPC3全人源抗體序列，能夠準(zhǔn)確地識別肝癌細(xì)胞表面的GPC3抗原。與傳統(tǒng)的CAR-T療法相比，Ori-C101有獨(dú)特的信號激活元件Ori，這個(gè)元件可以成倍提升記憶性免疫細(xì)胞的擴(kuò)增效率，從而增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤活性和持久性。在2021年美國臨床腫瘤學(xué)會（ASCO）年會上公布的數(shù)據(jù)中，Ori-C101在GPC3陽性晚期肝癌患者中表現(xiàn)出卓越的安全性和有效性，客觀緩解率（ORR）為44%，疾病控制率（DCR) 為 78%。迄今為止最長的隨訪時(shí)間超過22個(gè)月，更多的隨訪正在進(jìn)行中。目前，Ori-C101仍有一項(xiàng)P期臨床試驗(yàn)（NCT05652920）正在進(jìn)行中，這是一項(xiàng)I期、開放標(biāo)簽、多中心研究，旨在評估Ori-C101治療晚期肝細(xì)胞癌(HCC)的安全性、藥代動力學(xué)和初步療效。

• TC-CAR-031

TC-CAR-031，又稱為C-CAR031，是由阿斯利康設(shè)計(jì)、針對HCC的自體抗GPC3裝甲型CAR-T療法。如下圖所示，C-CAR031包括GPC3 CAR、T2A肽和裝甲型顯性負(fù)性TGF-βII型受體（TGFβRIIDN）。GPC3 CAR中包含表達(dá)靶向GPC3抗體、表達(dá)4-1BB和CD3z融合蛋白的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；TGFβRIIDN的表達(dá)可以保護(hù)細(xì)胞抵抗免疫抑制性腫瘤微環(huán)境；而T2A肽允許等量表達(dá)兩種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物。

Figure 5. The structure of C-CAR031

12月7日，AbelZeta宣布與阿斯利康（AstraZeneca）就C-CAR031簽署聯(lián)合開發(fā)協(xié)議。在2023 AACR年年會上，AbelZeta公布了一項(xiàng)在中國開展的研究者發(fā)起的臨床試驗(yàn)（NCT05155189）。這是該療法的首次人體試驗(yàn)，旨在研究C-CAR031治療HCC患者的可行性、安全性和初步療效，目前該研究正處于入組狀態(tài)。初步展示了C-CAR031的安全性、有效性、藥代動力學(xué)（PK）和藥效動力學(xué)（PD）數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示，C-CAR031在晚期肝細(xì)胞癌患者中具有良好的抗腫瘤活性和穩(wěn)健的PK/PD特征。

• 更多GPC3 CAR-T療法

藥品名稱	企業(yè)名稱	研發(fā)階段	適應(yīng)癥	臨床試驗(yàn)代碼
JWATM214001	藥明巨諾	NA	肝細(xì)胞癌	NCT05926726/NCT06144385
ECT204	優(yōu)瑞科生物	1期臨床	肝細(xì)胞癌	NCT04864054
CG1003	科濟(jì)藥業(yè)	1期臨床	肺鱗細(xì)胞癌	NCT02876978/NCT02395250
GB5011	吉?jiǎng)P基因	1/II期臨床	肝細(xì)胞癌	NCT02715362/NCT03130712
GLYCAR T cell therapy (Baylor College of Medicine)	貝勒醫(yī)學(xué)院	1期臨床	肝細(xì)胞癌	NCT04377932
Anti-GPC3 CAR T-cell therapy	南京大學(xué)	1期臨床	肝細(xì)胞癌	NCT04121273
Anti-GPC3 chimeric antigen receptor T cell therapy	湖南昭泰涌仁, 廣東昭泰體內(nèi)生物	1期臨床	鱗狀細(xì)胞癌,肝細(xì)胞癌	NCT03198546

4、締碼GPC3 CAR-T 細(xì)胞制備及測試

締碼生物擁有自己獨(dú)立開發(fā)的CAR-T先導(dǎo)分子篩選實(shí)驗(yàn)平臺。過去兩年，我們已成功完成了200多個(gè)項(xiàng)目的抗體先導(dǎo)分子開發(fā)工作，部分CAR-T先導(dǎo)分子已經(jīng)完成臨床前實(shí)驗(yàn)階段。針對GPC3靶點(diǎn)，締碼已成功完成多個(gè)抗體分子的CAR-T細(xì)胞制備及24小時(shí)短效殺傷測試。歡迎咨詢測試。

Figure 6. The data of CAR-T-GPC3/Huh-7 (Left) or 293-T (Right) 24 hours of co-culture

此外，為助力靶向GPC3生物藥研發(fā)，締碼還相應(yīng)開發(fā)了GPC3靶點(diǎn)全系列產(chǎn)品與，產(chǎn)品包括功能活性蛋白、流式驗(yàn)證抗體及參照抗體；服務(wù)涉及抗體人源化和親和力成熟。此外，為了加速GPC3靶向藥物研發(fā)，締碼還制備了GPC3靶點(diǎn)的B細(xì)胞種子庫，最快20天可獲得GPC3抗體先導(dǎo)分子。

產(chǎn)品類型	名稱	貨號	驗(yàn)證
活性蛋白	Human GPC3 Protein, hFc Tag	PME100113	SDS-PAGE, ELISA
FC驗(yàn)證單抗	Anti-GPC3 antibody(DMC371); IgG1 Chimeric mAb	DMC100371	FC
IHC驗(yàn)證單抗	Anti-GPC3 antibody(163D11), IgG1 Chimeric mAb	DMC100908	IHC
參照抗體	Anti-GPC3(Hu9F2) mAb	BME100147	ELISA
參照抗體	Anti-GPC3(codrituzumab biosimilar) mAb	BME100083	ELISA, FC
生物素標(biāo)記抗體	Biotinylated Anti-GPC3 antibody(DMC371); IgG1 Chimeric mAb	DMC100371B	/
生物素標(biāo)記抗體	Biotinylated Anti-GPC3 antibody(163D11), IgG1 Chimeric mAb	DMC100908B	/
生物素標(biāo)記抗體	Biotinylated Anti-GPC3(codrituzumab biosimilar) mAb	BME100083B	/
生物素標(biāo)記抗體	Biotinylated Anti-GPC3(Hu9F2) mAb	BME100147B	/

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