分子別名：淋巴細(xì)胞活化基因3（Lymphocyte-activation gene 3，LAG-3），又稱為CD233
發(fā)現(xiàn)：1990年由Triebel及其同事發(fā)現(xiàn)，在活化的人類NK和T細(xì)胞系上被鑒定出來。
家族：LAG-3是屬于免疫球蛋白（Ig）超家族的I型跨膜蛋白。
表達(dá)：活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞和漿細(xì)胞樣DC中表達(dá)。LAG3的表達(dá)是通過TCR或細(xì)胞因子(IL-12、IL-27、IL-15、IL-2和IL-7)的激活而誘導(dǎo)的。在多種腫瘤中，LAG-3都與較差的預(yù)后相關(guān)。
配體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了的發(fā)現(xiàn)了配體包括：MHC II分子，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素(LSECtin)，galectin-3，α-synuclein，F(xiàn)GL-1。
功能：LAG-3抑制T細(xì)胞的激活和細(xì)胞因子的分泌，從而保證免疫穩(wěn)態(tài)。LAG3能夠調(diào)控T淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞（APCs）的信號(hào)通路，在適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起到重要作用。與腫瘤、結(jié)核等多種疾病相關(guān)
從PD-1/PD-L1開始，開啟了免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療癌癥治療的新征程。隨著對(duì)免疫檢查點(diǎn)研究的深入，針對(duì)多個(gè)免疫檢查點(diǎn)都開展了研究，包括CTLA-4，LAG-3，TIM-3和TIGIT。本文主要介紹LAG-3。
1、LAG-3結(jié)構(gòu)
LAG-3由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)3部分組成，共含498個(gè)氨基酸。
胞外區(qū)：由四個(gè)Igg樣胞外結(jié)構(gòu)域組成：D1、D2、D3和D4。
D1: LAG3的D1結(jié)構(gòu)域位于膜遠(yuǎn)端，它有一個(gè)富含脯氨酸的獨(dú)特的環(huán)狀結(jié)構(gòu)（約包含30個(gè)氨基酸），這是LAG-3與MHC II類分子結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)。該區(qū)域的點(diǎn)突變可以增強(qiáng)或減少與MHCII的結(jié)合，而缺失則會(huì)完全破壞MHCII的結(jié)合。這個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)也是阻斷LAG3:MHCII相互作用的抗體的結(jié)合表位。
D2: D2結(jié)構(gòu)域起到定位D1結(jié)構(gòu)域與MHC II結(jié)合的位置，D1和D2都是LAG3與MHCII結(jié)合的必要和充分條件。LAG3中D3-D4域的缺失并不影響FGL1的結(jié)合，而D1或D2單獨(dú)都部分降低了FGL1與LAG3的結(jié)合，表明D1和D2都參與了FGL1/LAG3的相互作用。
D4: D4結(jié)構(gòu)域位于胞外近膜端，在穿膜金屬蛋白酶ADAM10和ADAM17的作用下，D4和跨膜區(qū)之間的連接肽斷裂形成可溶性LAG3（sLAG3）。
（數(shù)據(jù)來源：Fibrinogen-like Protein 1 Is a Major Immune Inhibitory Ligand of LAG-3）
胞質(zhì)區(qū)：絲氨酸磷酸化位點(diǎn)、“KIEELE”基序和谷氨酸-脯氨酸雙肽重復(fù)基序（EP序列）。
絲氨酸磷酸化位點(diǎn)是蛋白激酶C（PKC）的底物。EP序列和KIEELE基序?yàn)楦叨缺Ｊ匦蛄?。其中KIEELE基序具有特異性，其參與LAG-3胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這對(duì)LAG-3調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能起到關(guān)鍵作用。
2、LAG-3配體
MHC II分子：MHC II分子為L(zhǎng)AG-3的主要配體，MHC II類，由抗原呈遞細(xì)胞或黑素瘤細(xì)胞異常表達(dá)，與LAG3結(jié)合，然后通過LAG-3胞質(zhì)區(qū)域傳遞抑制信號(hào)。
LSECtin：LSECtin（肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素）屬于C型凝集素受體超家族，是II穿膜蛋白。它在肝臟和黑色素瘤細(xì)胞中高表達(dá)。通過與LAG-3的相互作用抑制CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞免疫應(yīng)答。
Galectin-3：Galectin-3（半乳糖凝集素-3）是一種可以結(jié)合半乳糖苷的可溶性凝集素，大小為31 kDa。在腫瘤微環(huán)境中，Galectin-3被許多細(xì)胞表達(dá)，而不是腫瘤細(xì)胞本身，它可與糖基化的LAG-3相互作用，可以抑制CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
α-synuclein：像MHCII一樣，α-synuclein結(jié)合到LAG-3 D1區(qū)域，并依賴于D2, D3或細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。
FGL-1：FGL1（纖維蛋白原樣蛋白1）在肝臟(低水平)和腫瘤細(xì)胞中（高水平）表達(dá)。FGL1是LAG3的高親和力配體。FGL1與LAG-3相互可以促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。阻斷FGL-1-LAG-3通路可以增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞抗腫瘤作用。在LAG3 D1結(jié)構(gòu)域的一個(gè)單點(diǎn)突變(Y73F)之前被證明會(huì)破壞MHC-II結(jié)合。然而，該突變并不影響FGL1-Ig結(jié)合。表明FGL1與LAG3以MHC-II獨(dú)立的方式相互作用。
3、LAG-3作用機(jī)制
LAG3胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的EP基序可與LAG3相關(guān)蛋白(LAP)結(jié)合。LAG3胞質(zhì)中的kieele基序在所有靈長(zhǎng)類動(dòng)物、小鼠和大鼠之間都是保守的。該序列中的單個(gè)賴氨酸殘基(小鼠中為L(zhǎng)ys468)是不可缺少的，并且在迄今為止測(cè)序的所有物種中都是保守的。
在配體結(jié)合時(shí)，LAG3以依賴于LAG3胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的方式抑制TCR通路，阻止了包括NFAT在內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子的激活，從而減少了細(xì)胞因子的產(chǎn)生和增殖。
（數(shù)據(jù)來源：Graydon Colin G,Mohideen Shifa,Fowke Keith R,LAG3’s Enigmatic Mechanism of Action）
靶向LAG-3的抗體對(duì)免疫細(xì)胞的影響
LAG-3對(duì)CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、pDCs起負(fù)向調(diào)控的作用，LAG-3促進(jìn)Tregs細(xì)胞的抑制活性。
（數(shù)據(jù)來源：The promising immune checkpoint LAG-3: from tumor microenvironment to cancer immunotherapy）
4、LAG-3相關(guān)藥物
以LAG-3為靶點(diǎn)的藥物主要治療領(lǐng)域包括癌癥和自身免疫性疾病。靶向LAG3藥物分為幾類：拮抗性抗體，激動(dòng)劑抗體，雙特異性抗體，APC激活劑。目前BMS的relatlimab、默沙東的favezelimab和MacroGenics的雙抗tebotelimab三款抗體處于靶向LAG-3研發(fā)的前列。
4.1 拮抗性抗體
百時(shí)美施貴寶（BMS）Relatlimab
PD-1和PD-L1治療在部分晚期惡性腫瘤患者中有效。然而，一個(gè)問題是：大多數(shù)患者對(duì)它沒有反應(yīng)。而抗LAG-3和抗PD-1聯(lián)合免疫療法在對(duì)抗PD-1耐藥性方面顯示出令人興奮的療效。第一個(gè)進(jìn)入臨床的LAG-3抑制性單抗是Relatlimab，它是一種IgG4亞型的全人源抗體。它阻斷了LAG-3與MHCⅡ的相互作用。在2021年的ASCO大會(huì)上，BMS公司公布了其LAG-3抗體Relatlimab與PD-1抗體納武單抗聯(lián)合用于治療晚期黑色素瘤的試驗(yàn)結(jié)果：355名接受relatlimab+納武單抗治療的患者，中位無進(jìn)展生存期10.1個(gè)月，1年無進(jìn)展生存率47.7%；359名接受納武單抗單藥治療的患者，中位無進(jìn)展生存期4.6個(gè)月，1年無進(jìn)展生存率36.0%；同時(shí)，Relatlimab的加入讓晚期黑色素瘤患者疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)降低了25%。2021年9月20日，百時(shí)美施貴寶宣布FDA受理LAG-3抗體Relatlimab的上市申請(qǐng)，并授予優(yōu)先審評(píng)資格，適應(yīng)癥為用于和PD-1抗體Nivolumab聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移性不可切除的黑色素瘤。它有望成為第一個(gè)上市的LAG-3抗體，開辟一類新的免疫治療藥物。
（數(shù)據(jù)來源：ASCO2021）
默沙東Favezelimab
Favezelimab是默沙東公司開發(fā)的一款在研LAG-3抗體，能夠阻斷MHCII類受體與LAG-3之間的相互作用，抑制LAG-3上調(diào)，進(jìn)而恢復(fù)T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。2021年7月28日，中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心（CDE）網(wǎng)站公示顯示，默沙東（MSD）的1類新藥MK-4280A注射液臨床試驗(yàn)申請(qǐng)獲得受理。MK-4280A是LAG-3抗體favezelimab（MK-4280）和PD-1抑制劑Keytruda的聯(lián)合治療方案。Keytruda是一款PD-1抑制劑。以上藥物都屬于LAG3的拮抗性抗體，通過阻斷LAG3與其配體的結(jié)合而阻斷LAG-3介導(dǎo)的對(duì)T細(xì)胞的抑制信號(hào)。拮抗性LAG3抗體既可激活效應(yīng)T細(xì)胞，也可以抑制Treg活性。而其他檢查點(diǎn)靶點(diǎn)（例如PD-1 / PD-L1和CTLA-4）僅能激活效應(yīng)T細(xì)胞，所以這種具有雙重作用機(jī)制的LAG3成為檢查點(diǎn)抑制的重要靶點(diǎn)。
諾華公司-LAG525
LAG525 (INN: leramilimab或IMP701)是由諾華公司(Novartis)開發(fā)的一種拮抗單克隆抗體(mAb)，它阻斷了LAG-3介導(dǎo)的腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞的抑制信號(hào)。這使得CD8 T細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞產(chǎn)生更好的細(xì)胞毒性反應(yīng)。該候選產(chǎn)品目前正在不同的II期臨床試驗(yàn)中。
（數(shù)據(jù)來源：Immutep: https://www.immutep.com/technology/lag-3-technology.html）
恒瑞：SHR-1802
SHR-1802是恒瑞開發(fā)的一款抗LAG-3單抗。2019年11月18日，恒瑞醫(yī)藥注射用SHR-1802獲得臨床試驗(yàn)?zāi)驹S可，適應(yīng)癥為標(biāo)準(zhǔn)治療失敗的晚期惡性腫瘤(NCT04414150)，目前，該藥物還處于臨床Ⅰ期。
信達(dá)生物：IBI110
IBI110是信達(dá)生物開發(fā)的一款新型抗LAG-3抗體，已在中國(guó)獲批臨床，擬開發(fā)用于治療血液癌癥和實(shí)體瘤。根據(jù)中國(guó)藥物臨床試驗(yàn)登記與信息公示平臺(tái)信息，信達(dá)生物正在開展一項(xiàng)開放性1期研究，以評(píng)估IBI110單藥及聯(lián)合PD-1抑制劑信迪利單抗治療晚期惡性腫瘤受試者的安全性、耐受性和有效性。
維立志博：LBL-007
LBL-007是維立志博開發(fā)的一種IgG4亞型全人源單克隆抗體，可通過結(jié)合人LAG-3蛋白來阻斷LAG-3蛋白與其配體的結(jié)合，從而解除LAG-3對(duì)T細(xì)胞的抑制作用，使T細(xì)胞恢復(fù)免疫功能，起到對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
維立志博正在開展兩項(xiàng)1期臨床試驗(yàn)：一項(xiàng)是評(píng)估LBL-007聯(lián)合PD-1抑制劑特瑞普利單抗一線治療不可切除或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的安全性、耐受性、有效性；另一項(xiàng)評(píng)估LBL-007在晚期實(shí)體瘤和晚期淋巴瘤患者中的安全性、耐受性、藥代動(dòng)力學(xué)及有效性。
時(shí)邁藥業(yè)：DNV3
DNV3是時(shí)邁藥業(yè)開發(fā)的一款抗LAG-3單抗。臨床前藥效學(xué)研究顯示，DNV3可精準(zhǔn)調(diào)控包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞(DC)等多類免疫細(xì)胞的功能，單藥治療具有顯著抗腫瘤藥效。同時(shí)，DNV3與化療、小分子靶向藥及PD-1免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)用可進(jìn)一步協(xié)同提高抗腫瘤藥效。2020年8月，DNV3在中國(guó)獲批一項(xiàng)臨床默示許可，擬開發(fā)用于晚期/轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤和淋巴瘤治療。值得一提的是，這也是時(shí)邁藥業(yè)獲得的首個(gè)新藥臨床試驗(yàn)批件。
4.2 雙特異性抗體
再鼎醫(yī)藥：MGD013
MGD013（tebotelimab）是一種能夠同時(shí)與PD-1和LAG-3相結(jié)合的雙特異性抗體。它是利用Macrogenics公司的DART?平臺(tái)開發(fā)的雙特異性抗體，旨在提高分子穩(wěn)定性，延長(zhǎng)抗體的半衰期。2018年11月，再鼎醫(yī)藥與MacroGenics公司達(dá)成合作，獲得了MGD013在大中華區(qū)的獨(dú)家開發(fā)及商業(yè)化授權(quán)。MGD013在血清中的半衰期很長(zhǎng)。據(jù)預(yù)測(cè)，Tebotelimab可以用于治療包含多種實(shí)體瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤在內(nèi)的廣泛癌癥類型。Tebotelimab的I期劑量遞增研究正在進(jìn)行。目前，再鼎在國(guó)內(nèi)開展了MGD013單藥，以及聯(lián)合HER2抗體（HER2+GC/GEJ，II/III期）、PARP抑制劑（晚期GC、TNBC、膽管/膽囊癌等）、VEGFR2抑制劑（肝細(xì)胞癌）等多個(gè)臨床研究。
岸邁生物：EMB-02
EMB-02是岸邁生物開發(fā)的一款PD-1和LAG-3的雙特異性抗體。在對(duì)PD-1抗體單藥治療耐藥的臨床前模型中，EMB-02已顯示出了顯著的抗腫瘤活性。EMB-02的1/2期臨床試驗(yàn)是一項(xiàng)多中心、開放、多劑量的首個(gè)人體臨床研究，旨在評(píng)估 EMB-02 在晚期實(shí)體瘤患者中的安全性和耐受性。臨床1期的首要目標(biāo)是確定藥物在臨床2期推薦劑量 (RP2D) 和安全時(shí)間。同時(shí)會(huì)評(píng)估 EMB-02 的藥代動(dòng)力學(xué)、免疫原性和抗腫瘤活性。
信達(dá)生物：IBI323
從PD-1/PD-L1開始，開啟了免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療癌癥治療的新征程。隨著對(duì)免疫檢查點(diǎn)研究的深入，針對(duì)多個(gè)免疫檢查點(diǎn)都開展了研究，包括CTLA-4，LAG-3，TIM-3和TIGIT。本文主要介紹LAG-3。
數(shù)據(jù)來源： PD-L1/LAG-3 bispecific antibody enhances tumor-specific immunity）
相對(duì)于親本抗體BI127，IBI323對(duì)PD-L1的結(jié)合親和力保持不變。BI127在Fc部分引入LALA突變(LALA, L234A, L235A)，降低了Fc介導(dǎo)的抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的毒性(ADCC)和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。它同時(shí)抑制LAG-3和PD-L1介導(dǎo)的兩個(gè)抑制性信號(hào)通路，比單靶點(diǎn)更強(qiáng)且更持久的T細(xì)胞活化潛力。它可以將表達(dá)PD-L1的腫瘤細(xì)胞與表達(dá)LAG-3的T細(xì)胞拉近，從而形成穩(wěn)定的TCR：MHC免疫突觸，進(jìn)一步激活T細(xì)胞。CIBI323A101是一項(xiàng)在中國(guó)開展的評(píng)估IBI323治療標(biāo)準(zhǔn)治療失敗的晚期惡性腫瘤受試者的安全性、耐受性和抗腫瘤活性的I期研究(NCT04916119)。
ABL Bio：ABL501
ABL501是一種雙特異性抗體，可阻斷PD-L1和LAG-3檢查點(diǎn)通路，以克服目前PD-(L)1治療的局限性。ABL501是一種全長(zhǎng)抗LAG-3單抗，融合了PD-L1單抗的scFv。ABL501表現(xiàn)出比單一療法和聯(lián)合療法更好的活性。目前處于臨床Ⅰ期，適應(yīng)癥為晚期實(shí)體瘤。
4.3 LAG3的激動(dòng)劑抗體
IMP761是一種LAG-3激動(dòng)劑抗體。它是一種人源化IgG4單克隆抗體。使用針對(duì)被激活的T細(xì)胞表面的LAG-3受體的激動(dòng)劑抗體，可以直接向T細(xì)胞傳遞更強(qiáng)的抑制信號(hào)，從而阻止T細(xì)胞繼續(xù)增殖，并對(duì)患者的組織產(chǎn)生反應(yīng)。IMP761的臨床發(fā)展我們的目標(biāo)是解決自身免疫性疾病的根源，IMP761的臨床發(fā)展我們的目標(biāo)是解決自身免疫性疾病的根源。目前，該候選產(chǎn)品還處于臨床前階段。
4.4 APC激活劑
Eftilagimod alpha（IMP321）是一種重組蛋白，由一種LAG-3的二聚體組成的可溶性LAG-3，它與APC表面的主要組織相容性復(fù)合體(MHC) II類分子結(jié)合，導(dǎo)致抗原呈遞細(xì)胞(如單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)的激活，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞毒性CD8+ T細(xì)胞數(shù)量和激活的生理增加，是一種積極的免疫治療機(jī)制。通過這些作用機(jī)制，可溶性的LAG-3(如IMP321/eftilagimod alpha)可以增加對(duì)癌癥抗原的免疫應(yīng)答。目前正處于癌癥治療的晚期臨床開發(fā)階段。目前為止，IMP321作為單一療法并未顯示出顯著的療效，但作為聯(lián)合療法具有前景。
（數(shù)據(jù)來源：Immutep: https://www.immutep.com/technology/lag-3-technology.html）
4.4 其他臨床LAG-3靶點(diǎn)藥物
根據(jù)已有的臨床藥物研究來看，LAG-3藥物聯(lián)合其他免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療是研究的主流，并且顯示出了良好的治療效果。
5、關(guān)于締碼
締碼生物科技有限公司是一家專注腫瘤免疫靶點(diǎn)相關(guān)抗體分子發(fā)現(xiàn)的創(chuàng)新型生物技術(shù)公司。公司的功能性蛋白表達(dá)平臺(tái)和締碼重組單克隆抗體開發(fā)平臺(tái)的完美結(jié)合，可滿足藥企臨床前抗體分子發(fā)現(xiàn)的迫切需求。締碼生物獨(dú)有的締碼重組單克隆抗體種子庫發(fā)現(xiàn)平臺(tái)，能夠高效而快速的分離出功能性抗體分泌的B細(xì)胞，并克隆其抗體基因序列。另外，公司建立的抗體工程改造平臺(tái)和抗體藥效評(píng)價(jià)體系可以為藥企客戶提供一體化、全方位的臨床前研發(fā)解決方案。
| 產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
| 重組蛋白 | PME100512 | Human LAG3 Protein, His Tag |
| PME100513 | Human LAG3 Protein, hFc Tag | |
| PME-C100056 | Cynomolgus LAG3 Protein, hFc Tag | |
| FC驗(yàn)證抗體 | DME100160 | Anti-LAG3 antibody(DM160); Rabbit mAb |
| 參照抗體 | BME100062 | Anti-LAG3 (relatlimab biosimilar)mAb |
| 生物素標(biāo)記抗體 | BME100062B | Biotinylated Anti-LAG3 (relatlimab biosimilar)mAb |
| DME100160B | Biotinylated Anti-LAG3 antibody(DM160); Rabbit mAb |
參考文獻(xiàn)：
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